凋亡相关因子ELISA星空体育莱切是用于检测细胞凋亡过程中相关因子含量的重要工具。采用酶联免疫吸附法(ELISA)原理,用于定性或定量检测血清、血浆、组织液、组织匀浆等液体样本中的凋亡相关因子,如Fas/CD95、FasL(Fas配体)等。这些因子在细胞凋亡过程中起着关键作用,因此该星空体育莱切在科研领域具有广泛应用。
1、准备工作:
从星空体育莱切中取出所需的试剂和样本,并确保它们已平衡至室温。
配制洗涤液,通常是通过将洗涤液浓缩液与蒸馏水按一定比例混合得到。
准备标准品,通常是一系列已知浓度的凋亡相关因子溶液,用于建立标准曲线。
2、加样:
在微孔板中依次加入标准品和待测样本,注意加样量要准确,且避免产生气泡。
轻轻摇晃微孔板,使样品与板底的抗体充分混合。
3、孵育:
将微孔板置于适当的温度下(通常是室温或37℃)进行孵育,使样品中的凋亡相关因子与抗体充分结合。
孵育时间根据星空体育莱切的说明进行,通常为一定时间(如30分钟)。
4、洗涤:
孵育完成后,用洗涤液洗涤微孔板,以去除未结合的样品和杂质。
洗涤时要确保充分洗去残留物,通常需要洗涤3-5次。
5、加酶标抗体:
在微孔板中加入酶标抗体,使其与结合在抗体上的凋亡相关因子结合。
轻轻摇晃微孔板,使酶标抗体与抗体充分混合。
6、再次孵育和洗涤:
将微孔板置于适当的温度下进行再次孵育,使酶标抗体与凋亡相关因子充分结合。
孵育完成后,再次用洗涤液洗涤微孔板,以去除未结合的酶标抗体。
7、加底物显色:
在微孔板中加入底物溶液,使酶标抗体与底物反应产生颜色变化。
轻轻摇晃微孔板,使底物与酶标抗体充分混合。
8、终止反应和测定结果:
当颜色达到稳定的最深值时,加入终止液终止反应。
使用酶标仪在适当的波长下测定微孔板的吸光度值。
9、数据分析和计算:
根据标准品的吸光度值和已知浓度建立标准曲线。
根据待测样本的吸光度值在标准曲线上找到对应的凋亡相关因子浓度。
对结果进行必要的修正和计算,得到最终的凋亡相关因子浓度值。